信帆生物：引物合成文獻(xiàn)上線

《 LncRNA PSMA3-AS1調(diào)節(jié)miR-186-5p/SOX4軸對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響》

摘要： 目的 探索長(zhǎng)鏈非編碼RNA人蛋白酶體α亞基3型的反義RNA1（long non⁃coding RNA PSMA3⁃AS1，lncRNA PSMA3⁃AS1）對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響以及對(duì)微小RNA⁃186⁃5p（microRNA⁃186⁃5p，miR⁃186⁃5p）/性別決定區(qū)Y框蛋白4（sex determining region Y box protein 4，SOX4）軸的調(diào)控機(jī)制。方法 利用LipofectamineTM 3000試劑將si⁃PSMA3⁃AS1及其陰性對(duì)照、miR⁃186⁃5p inhibitor及其陰性對(duì)照分別轉(zhuǎn)染至人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SH⁃SY5Y中，隨機(jī)分為Control組（未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒）、si⁃NC組（轉(zhuǎn)染si⁃PSMA3⁃AS1陰性對(duì)照）、si⁃PSMA3⁃AS1組（轉(zhuǎn)染si⁃PSMA3⁃AS1）、si⁃PSMA3⁃AS1+miR⁃NC組（共轉(zhuǎn)染si⁃PSMA3⁃AS1和miR⁃186⁃5p inhibitor陰性對(duì)照）、si⁃PSMA3⁃AS1+miR⁃186⁃5p inhibitor組（共轉(zhuǎn)染si⁃PSMA3⁃AS1和miR⁃186⁃5p inhibitor）。采用qRT⁃PCR法檢測(cè)各組細(xì)胞中PSMA3⁃AS1、miR⁃186⁃5p和SOX4 mRNA的表達(dá)水平；Western blot檢測(cè)各組轉(zhuǎn)染細(xì)胞中SOX4蛋白的表達(dá)水平。采用CCK⁃8法、Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組轉(zhuǎn)染細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲能力。采用生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)和雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證miR⁃186⁃5p與PSMA3⁃AS1和SOX4之間的靶向關(guān)系。結(jié)果 相較于Control組和si⁃NC組，si⁃PSMA3⁃AS1組細(xì)胞中的PSMA3⁃AS1表達(dá)水平、細(xì)胞存活率、遷移及侵襲細(xì)胞數(shù)均降低（均P<0.001）。雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果顯示，PSMA3⁃AS1能靶向負(fù)調(diào)控miR⁃186⁃5p，而miR⁃186⁃5p能靶向負(fù)調(diào)控SOX4。敲低PSMA3⁃AS1后細(xì)胞的miR⁃186⁃5p表達(dá)水平升高，而SOX4 mRNA和蛋白表達(dá)水平均降低（均P<0.001）。回補(bǔ)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，相較于si⁃PSMA3⁃AS1+miR⁃NC組，si⁃PSMA3⁃AS1+miR⁃186⁃5p inhibitor組SOX4 mRNA及蛋白表達(dá)水平、細(xì)胞存活率、遷移及侵襲細(xì)胞數(shù)均升高（均P<0.001），而miR⁃186⁃5p表達(dá)水平降低（P<0.001）。結(jié)論 敲低PSMA3⁃AS1可能通過調(diào)節(jié)miR⁃186⁃5p/SOX4軸抑制神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲行為。

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